TCO-PEG-RB,反式環(huán)辛烯-聚乙二醇,羅丹明衍生物用于超分辨熒光顯微成像

今天小編整理并分享關(guān)于羅丹明衍生物用于超分辨熒光顯微成像：

目前，超分辨熒光顯微成像技術(shù)主要分為三大類:受激發(fā)射耗損技術(shù)l16(stimulated emission depletion，STED)、結(jié)構(gòu)光照明顯微鏡技術(shù)(structured illumination microscopy，SIM)、光激活定位顯微鏡技術(shù)(photo-activation localization microscopy, PALM)與隨機(jī)光學(xué)重構(gòu)顯微鏡技術(shù)(stochasticoptical reconstruction microscopy, STORM)。

羅丹明衍生物的合成：羅丹明B鏈接PEG的衍生物（ RhB-4PEG,RhB-7PEG，.RhB-

.10PEG,RhB-22PEG)

將羅丹明B (7.200 g, 15.00 mmol)，四乙基二乙醇單甲醚（3.124 g, 15.00 mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽EDC·HCI (3.600 g,18.00 mmol）和干燥的CH2Cl2 ( 120 mL)添加到一個(gè)裝有磁力攪拌棒的圓底燒瓶中。在冰水浴中冷卻0℃后，攪拌15 min，再將4-二甲基吡啶DMAP (2.190.g, 18.00 mmol)加入到圓底燒瓶中。該反應(yīng)在25℃溫度下過(guò)夜，將反應(yīng)停止。先用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將CH2Cl2除去，再加入.200 mL乙醇，發(fā)現(xiàn)圓底燒瓶瓶底有白色沉淀，利用抽濾將白色沉淀除去，然后利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液中的乙醇除去。最后用層析色譜柱將粗產(chǎn)物進(jìn)行純化(洗脫液:CH2Cl2然后，CH2Cl2/CH3CH2OH = 10/1, v/v)，.將過(guò)柱液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑后，加入約50 mL CH2Cl2，再加入約50 mL的水（加入約4 mL濃鹽酸）進(jìn)行萃取洗滌3次。在用無(wú)水 Na2SO4將萃取液進(jìn)行干燥后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將CH2Cl2除去，得到紅色黏狀樣品（2.510 g,25%)。

羅丹明B分子的光漂白速度很快，剛開始時(shí)處于“亮態(tài)”的羅丹明B分子個(gè)數(shù)驟減。大約2s后處于“亮態(tài)”的分子個(gè)數(shù)已經(jīng)很少，之后趨于穩(wěn)定階段。通過(guò)RhB，RhB-4PEG，RhB-22PEG三種物質(zhì)在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，得到的光子數(shù)和占空比的信息，可以發(fā)現(xiàn)隨著聚乙二醇(PEG)單元數(shù)的增加，羅丹明B與聚乙二醇鏈接產(chǎn)生的衍生物的光子數(shù)和占空比都有先增大后減小的趨勢(shì)。在接下來(lái)的工作需要找到具有合適單元數(shù)的聚乙二醇與羅丹明B的衍生物，使得其光子數(shù)盡可能大，而占空比盡可能小，以達(dá)到優(yōu)化超分辨熒光圖像的目的。

TCO-PEG-FITC，反式環(huán)辛烯-聚乙二醇-熒光素

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