快速內(nèi)切酶是一系列能夠快速消化DNA的工程限制性內(nèi)切酶。所有快速內(nèi)切酶在通用酶中表現(xiàn)出優(yōu)越的活性? 和CutOne? 顏色緩沖，并能消化DNAin5～15分鐘。這使得限制性內(nèi)切酶的任何組合在一個(gè)反應(yīng)管中同時(shí)工作，并且消除了連續(xù)消化的需要。快速內(nèi)切酶已通過多項(xiàng)嚴(yán)格的質(zhì)量控制，可用于消化質(zhì)粒、基因組和病毒DNA以及PCR產(chǎn)物。CutOne?顏色緩沖液包括密度試劑以及紅色和黃色跟蹤染料，允許直接將反應(yīng)混合物裝載在凝膠上。CutOne的紅色染料? 顏色緩沖液在1%瓊脂糖凝膠中以2.5 kb雙鏈DNA片段遷移，黃色染料在1%瓊脂糖凝膠中以10 bp雙鏈DNA片段遷移。

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艾美捷快速內(nèi)切酶DpnI：

Cat #: C-BSM585

Size: 50 rxns

Storage: -20°C

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快速內(nèi)切酶DpnI組成：

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推薦反應(yīng)條件

1xCutOne“緩沖器；

37℃培養(yǎng)；

熱滅活

在80℃下培養(yǎng)20分鐘。

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質(zhì)量控制

功能測(cè)試

在CutOne“含有1μg pUC19 DNA和1μl FlyCut”Dpnl的緩沖液中，在37℃培養(yǎng)15分鐘，20μl反應(yīng)得到瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定的完全消化。

延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間/Star活性測(cè)定

在含有1μg pUC19 DNA和1μul FlyCut Dpnl的CutOne“”緩沖液中，在37℃下培養(yǎng)3小時(shí)，20μl的反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致DNA模式無可檢測(cè)的核酸酶降解，如瓊脂糖凝膠電泳所確定。較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間可能會(huì)導(dǎo)致star活性。

結(jié)扎和復(fù)發(fā)

用FlyCut’Dpnl在37°C下進(jìn)行10倍酶切后，95%以上的DNA片段可與T4 DNA Ligaseat 22℃連接，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，95%以上的DNA片段可與FlyCut’Dpnl連接。

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在推薦的反應(yīng)條件下，該酶能在5～15min內(nèi)消化單位底物，最適反應(yīng)溫度為37℃。

當(dāng)?shù)孜顳NA被PCG甲基化酶甲基化時(shí)，這種限制性內(nèi)切酶的切割可能受阻或受損。

當(dāng)?shù)孜顳NA被COBI甲基化酶甲基化時(shí)，這種限制性內(nèi)切酶的切割可能受阻或受損。

80°C孵育20 min可使酶失活，3 h孵育不顯示star活性，但長(zhǎng)時(shí)間孵育可使star活性升高。