用于疾病的單克隆抗體是一類快速發(fā)展的藥物，具有親和力強、特異性強、半衰期長和藥理學效力強的特點。這些特性使抗體成為開發(fā)針對多種人類疾病的有效治療方法的成熟平臺。它們的應用領域不僅限于標準的免疫球蛋白G (IgG)格式，還可以擴展到抗體片段(scFv, VHH)、藥物偶聯物和雙特異性等新型格式的"不可藥物化"靶點。隨著眾多抗體治療藥物(Ab1)不斷進入臨床前開發(fā)和臨床試驗，這些項目對高質量的關鍵生物分析試劑的需求很高。在這種情況下，抗獨特型抗體(（Anti-idiotype antibody, Anti-ID Abs)已成為臨床前和臨床階段生物分析應用的優(yōu)選方案之一。常用的制備方法包括體內雜交瘤技術、體外噬菌體展示免疫抗體庫或合成抗體庫。

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兔單抗以其高親和力和多樣性而聞名，使其成為治療候選生物分析程序中高度專業(yè)化研究試劑的潛在有用來源。過去兔單克隆抗體的產生采用雜交瘤技術;然而，目前的發(fā)現是由更強大的單個B細胞培養(yǎng)和克隆方法驅動的。

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高質量的抗獨特型抗體(Anti-ID Abs, Ab2)，特別是CDR特異性的Ab2，對開發(fā)敏感、特異和穩(wěn)健的PK檢測和抗藥物抗體(ADA)檢測至關重要，以支持藥物開發(fā)項目的臨床前和臨床研究。研究人員使用基于兔單個B細胞技術的方法來擴大了常規(guī)制備大樣本抗獨特型抗體的能力，并且取得了很高的成功。

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基于單個B細胞技術的Xten? Mab Single B兔單克隆抗體開發(fā)有三個主要流程，鑒定和分離單個B細胞；擴增和克隆抗體基因；表達、篩選和鑒定抗原特異性抗體。

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Xten? Mab Single B兔單克隆抗體開發(fā)以單個B細胞為起始點，利用每個B細胞只產生一種特異性抗體的特性，直接從免疫的兔子中通過隨機分離和抗原特異性分離兩種方式從外周血或淋巴組織中分離單B細胞，從單個B細胞中擴增出抗體基因，進而獲得抗原特異性抗體。該技術所制備的抗體具有高通量、高效率、高穩(wěn)定性、高特異性等優(yōu)點，保留了豐富的基因多樣性和輕重鏈可變區(qū)的天然配對，應用前景廣泛，是最高效的抗體篩選方法之一。特別是在快速應對病原微生物傳染病的抗體開發(fā)上有著巨大優(yōu)勢。

在這項研究中，研究人員建立了一種富集IgG+ B細胞的方法，并從外周血單個核細胞(PBMC)中鑒定出抗原特異性IgG+ B細胞。通過基于磁珠的負向選擇策略有效地清除PBMCs中的非IgGB細胞，包括IgM B細胞，髓系細胞和T細胞。這種技術不僅顯著提高了IgG+ B細胞的數量，而且還縮短了分選時間，從而有可能提高B細胞的存活率，這有助于提高PCR及后續(xù)分子克隆的成功率。

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從培養(yǎng)的兔B細胞中發(fā)現Ab1?CDR特異性抗獨特型抗體

在臨床前開發(fā)和臨床試驗期間，抗獨特型抗體是PK和ADA檢測所需的寶貴試劑，用于治療藥物的生物分析支持。高靈敏度、高特異性、高親和力以及表位結合特異性是該類抗體試劑的重要特點?；谕脝慰寺細胞技術發(fā)現的單克隆抗體使研究人員能夠在滿足嚴格的生物分析性能要求的同時，在多種單克隆抗體項目中持續(xù)、高效和高產地制備出具有所需特性的單克隆抗獨特型抗體組合，為單抗治療開發(fā)項目的生物分析支持提供了有價值的關鍵試劑。

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參考文獻

WeiYu Lin,Rapid identification of anti-idiotypic mAbs with high affinity and diverse epitopes by rabbit single B-cell sorting-culture and cloning technology,PLoS One, December 21, 2020.